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產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱:人食管平滑肌細(xì)胞

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 產(chǎn)品廠商:乾思生物
  • 產(chǎn)品文檔:
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簡單介紹:
人食管平滑肌細(xì)胞
詳情介紹:

產(chǎn)品基本信息

細(xì)胞名稱: 人食管平滑肌細(xì)胞
種屬來源:
組織來源: 正常食管組織
疾病特征: 正常原代細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài): 長梭狀細(xì)胞
生長特性: 貼壁生長
培養(yǎng)基: 我們推薦使用EliteCell原代平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)體系(產(chǎn)品編號(hào):PriMed-EliteCell-004)作為體外培養(yǎng)原代食管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)基。
生長條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%; 溫度:37 ℃, 
傳代方法: 1:2至1:6,每周2次。
凍存條件: 90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO,液氮儲(chǔ)存
細(xì)胞鑒定: 平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)免疫熒光染色為陽性,經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于 90%。
QC檢測(cè): 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。


人食管平滑肌細(xì)胞特點(diǎn)和簡介

食管是咽和胃之間的消化管,哺乳動(dòng)物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層:黏膜層、黏膜下層、肌層、外膜。食管平滑肌集中在肌層,僅在食管的下 2/3段存在,其中中段的 1/3位骨骼肌和平滑肌混合組成,下 1/3段全部為平滑肌,而上段1/3全部為骨骼肌。
食管的運(yùn)動(dòng),上部的橫紋肌受舌咽神經(jīng)和迷走神經(jīng)的支配,這些運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元末梢以運(yùn)動(dòng)終板形式進(jìn)入骨骼肌。迷走神經(jīng)尚支配食管其余部分的平滑肌,其節(jié)前纖維末梢與食管壁內(nèi)神經(jīng)叢的節(jié)細(xì)胞發(fā)生突觸聯(lián)系,再發(fā)出節(jié)后纖維支配平滑肌細(xì)胞。在吞咽時(shí),吞咽**興奮通過上述運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元和迷走神經(jīng)傳出纖維,引起食管各段的肌肉發(fā)生蠕動(dòng)。食管壁內(nèi)神經(jīng)叢可以不依賴外來神經(jīng)來控制食管蠕動(dòng)。

人食管平滑肌細(xì)胞接受后處理

1) 收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查是否漏液 ,如果漏液,請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。

 2) 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長 狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

 3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

 4) 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請(qǐng)及 時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

 5) 接到細(xì)胞次日,請(qǐng)檢查細(xì)胞是 否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。
 

人食管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。**天換液并 檢查細(xì)胞密度。

 2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
   
     1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
   
     3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

     4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;

    1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

人食管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

 1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請(qǐng)及 時(shí)和我們聯(lián)系。
 
 2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細(xì)胞因子 等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問 題,責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

 3.   用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量 從瓶 壁脫落,將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時(shí),再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均 會(huì)貼壁,若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán) 染色測(cè)定細(xì)胞活力,如果證實(shí)細(xì)胞活力正常, 請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活 力,請(qǐng)拍下 照片及時(shí)和我們聯(lián)系,信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。

 4.   靜置細(xì)胞貼壁后,請(qǐng)將細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出,留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng),待細(xì) 胞匯 合度  80%左右時(shí)正常傳代。

 5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,細(xì)胞 傳代時(shí)可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

 6.   建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和 Procell 技術(shù) 部 溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián) 系,告知細(xì)胞的具體情況,以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

 7.該細(xì)胞僅供科研使用。


產(chǎn)品說明書pdf版和相關(guān)資料下載

產(chǎn)品應(yīng)用舉例

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