產品詳情
簡單介紹:
人輸卵管平滑肌細胞
詳情介紹:
產品基本信息
細胞名稱: | 人輸卵管平滑肌細胞 |
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種屬來源: | 人 |
組織來源: | 手術切除的正常輸卵管組織 |
疾病特征: | 正常原代細胞 |
細胞形態(tài): | 梭形細胞,不規(guī)則細胞 |
生長特性: | 貼壁生長 |
培養(yǎng)基: | 我們推薦使用EliteCell原代平滑肌細胞培養(yǎng)體系(產品編號:PriMed-EliteCell-004)作為體外培養(yǎng)原代輸卵管平滑肌細胞的培養(yǎng)基。 |
生長條件: | 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%; 溫度:37 ℃, |
傳代方法: | 1:2至1:6,每周2次。 |
凍存條件: | 90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO,液氮儲存 |
細胞鑒定: | 平滑肌肌動蛋白(α-SMA)免疫熒光染色為陽性,經鑒定細胞純度高于90%。 |
QC檢測: | 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。 |
人輸卵管平滑肌細胞特點和簡介
輸卵管位于人體的盆腔內,一般的人有兩條,左、右輸卵管各位于子宮一側。它們由子宮底外側角部向外,平行伸展,先達卵巢的子宮端,再沿卵巢系膜緣上行至卵巢的輸卵管端,且呈弓形而覆蓋于卵巢上,然后向下、向內行,終止于卵巢的游離緣及其內側面上部。
輸卵管是卵子運輸、儲存、獲能,以及卵母細胞采取、運送、成熟、受精和早期胚胎發(fā)育的重要場所。輸卵管與其他空腔器官相似,其管壁由內向外為粘膜層、肌層和漿膜層所構成。其中,肌層的結構和厚度因不同節(jié)段而有差異,峽部肌層*厚,管腔亦*小。輸卵管肌層與子宮肌層相連,子宮*內層的縱行肌至峽部消失。
人輸卵管平滑肌細胞接受后處理
1) 收到細胞后,請檢查是否漏液 ,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
4) 如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
5) 接到細胞次日,請檢查細胞是 否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們取得聯(lián)系。
人輸卵管平滑肌細胞培養(yǎng)操作
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。**天換液并 檢查細胞密度。2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
人輸卵管平滑肌細胞培養(yǎng)注意事項
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細胞因子 等,確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問 題,責任由客戶自行承擔。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落,將細胞置于培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數細胞均 會貼壁,若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力,如果證實細胞活力正常, 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結果顯示細胞無活 力,請拍下 照片及時和我們聯(lián)系,信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
4. 靜置細胞貼壁后,請將細胞瓶內的培養(yǎng)基倒出,留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng),待細 胞匯 合度 80%左右時正常傳代。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內多余的培養(yǎng)基可收集備用,細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和 Procell 技術 部 溝通交流。由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián) 系,告知細胞的具體情況,以便我們 的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。
7.該細胞僅供科研使用。