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產(chǎn)品詳情
簡單介紹:
人小腸粘膜上皮細(xì)胞
詳情介紹:
產(chǎn)品基本信息
細(xì)胞名稱: | 人小腸粘膜上皮細(xì)胞 |
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種屬來源: | 人 |
組織來源: | 正常小腸組織 |
疾病特征: | 正常原代細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài): | 上皮細(xì)胞樣,多角形細(xì)胞 |
生長特性: | 貼壁生長 |
培養(yǎng)基: | 我們推薦使用EliteCell原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系(產(chǎn)品編號:PriMed-EliteCell-001)作為體外培養(yǎng)原代腸粘膜上皮細(xì)胞的培養(yǎng)基。 |
生長條件: | 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%; 溫度:37 ℃, |
傳代方法: | 1:2至1:6,每周2次。 |
凍存條件: | 90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO,液氮儲存 |
細(xì)胞鑒定: | 廣譜角蛋白(PCK)免疫熒光染色為陽性,經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。 |
QC檢測: | 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。 |
人小腸粘膜上皮細(xì)胞特點(diǎn)和簡介
小腸位于腹中,上端接幽門與胃相通,下端通過闌門與大腸相連,是食物消化吸收的主要場所。一般根據(jù)形態(tài)和結(jié)構(gòu)變化將小腸分為三段,分別為十二指腸,空腸和回腸。
小腸壁結(jié)構(gòu)一般分4層,由外向內(nèi)依次為:漿膜層,平滑肌層,粘膜下層和粘膜層。粘膜層又分為3層:靠近粘膜下層的是一層平滑肌,稱為粘膜肌層。其次為結(jié)締組織,又稱為固有層。*后面向腸腔的是一層柱狀上皮細(xì)胞構(gòu)成的粘膜。小腸粘膜有縱行和橫行皺襞,并有無數(shù)細(xì)小的指狀突起,稱為絨毛。絨毛的基底處粘膜內(nèi)陷成管狀,稱為利貝屈恩氏隱窩。隱窩基底部的上皮細(xì)胞不斷地進(jìn)行有絲分裂,產(chǎn)生新細(xì)胞。隱窩上皮中還有許多杯狀細(xì)胞,它分泌粘液,起滑潤食物和保護(hù)粘膜的作用。
人小腸粘膜上皮細(xì)胞接受后處理
1) 收到細(xì)胞后,請檢查是否漏液 ,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。2) 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長 狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
4) 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請及 時進(jìn)行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
5) 接到細(xì)胞次日,請檢查細(xì)胞是 否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
人小腸粘膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)操作
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。**天換液并 檢查細(xì)胞密度。2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
人小腸粘膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細(xì)胞因子 等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問 題,責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會有少量 從瓶 壁脫落,將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細(xì)胞均 會貼壁,若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍(lán) 染色測定細(xì)胞活力,如果證實(shí)細(xì)胞活力正常, 請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活 力,請拍下 照片及時和我們聯(lián)系,信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。
4. 靜置細(xì)胞貼壁后,請將細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出,留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng),待細(xì) 胞匯 合度 80%左右時正常傳代。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,細(xì)胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和 Procell 技術(shù) 部 溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?,個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián) 系,告知細(xì)胞的具體情況,以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7.該細(xì)胞僅供科研使用。